国产黄色三级av_亚洲欧美日韩综合色妞网_天堂√在线中文最新版网_欧美电影成人在线_成人三级电影在线观看_夜月直播大全免费下载_欧美中文字幕三级dvd_超碰最新上传国产情侣_久久精品国产亚洲av麻豆h_丰满少妇被猛男进入高清播

 
當(dāng)前位置：
實驗技術(shù) | PCR實用tips 請查收！
來源: | 作者:百菱生物 | 發(fā)布時間: 764天前 | 2039 次瀏覽 | 分享到:

此文章轉(zhuǎn)載自：無錫耐思NEST





PCR（Polymerase Chain Reaction）是1983年由Kary Mullis發(fā)明，至今仍廣泛使用的DNA擴增技術(shù)。它通過高溫解鏈、低溫退火、中溫擴增的過程，來實現(xiàn)目標(biāo)片段DNA的指數(shù)級擴增。


PCR反應(yīng)體系可以簡單概括為三部分：DNA模板（Template）、引物（Primer）及DNA聚合酶預(yù)混液（PreMix，MasterMix等），其中商業(yè)化的DNA聚合酶產(chǎn)品預(yù)混液已包括濃度優(yōu)化過的DNA聚合酶、三磷酸核苷（NTPs）、Mg2+、緩沖液及惰性染料等，可以根據(jù)實驗需要選擇擴增速度、保真性不同的DNA聚合酶以及預(yù)混染料的產(chǎn)品。整個體系經(jīng)常為20μL或50μL的體積，可置于0.1mL或0.2mL的PCR管中。


PCR熱循環(huán)儀是實現(xiàn)PCR反應(yīng)的外部硬件，按照設(shè)定的反應(yīng)程序，利用金屬浴來按時加熱、冷卻PCR反應(yīng)體系來完成解鏈、退火和擴增的過程。溫度和時間的設(shè)定受引物Tm（DNA Melting Temperature，熔解溫度）、目標(biāo)序列長度及DNA聚合酶擴增速度影響。一個典型的PCR程序如下：

PCR體系組分的Tips：



1. DNA模板
a)起始模板含量依據(jù)DNA類型及DNA聚合酶性質(zhì)來決定。一般質(zhì)粒DNA模板起始含量為0.1~1ng，基因組DNA以5-50ng為佳，例如25ng/μL的基因組DNA模板，加1μL左右就夠了。過少的模板會降低得率，過多則會導(dǎo)致非特異性擴增。
b)模板提取過程中，模板完整性受到損壞或提取試劑殘留都可能會導(dǎo)致PCR反應(yīng)失敗。PCR反應(yīng)出現(xiàn)不擴增或異常時，可以考慮用電泳檢驗DNA完整性以及使用Nanodrop測定DNA純度來排除問題。
2. 引物
a)引物設(shè)計對長度、堿基構(gòu)成、序列有很多限制，但目前很多軟件都可以輔助引物設(shè)計來規(guī)避可能出現(xiàn)的問題。擴增引物和用于引入點突變的引物都可以借助軟件來設(shè)計。
b)引物終濃度需要控制在適配DNA聚合酶的范圍內(nèi)，實際使用時可以將上下游引物預(yù)混直接加入，減少時間及槍頭成本哦。
3. 水
一定要用不含DNA酶（DNase-free）的水，也可以預(yù)混到引物里面，算好濃度和體積就行，體系不足的體積都由水來補足。

4. DNA聚合酶預(yù)混液

a)最后加入體系以保證對存貨（stock）的最小污染，加完后可用槍頭緩慢混勻。

b)直接上電泳的基因分型實驗可以選擇預(yù)混Loading buffer的DNA聚合酶，省去了很多加樣的時間。


PCR結(jié)束后應(yīng)盡量當(dāng)天進行后續(xù)實驗，或?qū)a(chǎn)物置于4℃短期保存哦。

稀釋系數(shù)tips：1）10X的溶液20μL體系中加2μL，2X的溶液20μL體系中加10μL；2）4X溶液與4X溶液等體積混合后為2X預(yù)混液（Premix）。

最后劃重點，每次PCR實驗時不要忘了包括陰性和陽性對照。


附：可使用到的NEST產(chǎn)品


 PCR系列 

 點擊圖片可查看產(chǎn)品詳情 






 移液吸頭 

 點擊圖片可查看產(chǎn)品詳情 






 微量離心管 

 點擊圖片可查看產(chǎn)品詳情 







如果您有購買意向，歡迎致電我們的代理商或銷售人員！

聯(lián)系我們

電話：020-29842979

QQ:1164119484、1740588570


郵箱：[email protected]

網(wǎng)址：cna2ztoys.cn

關(guān)注我們，獲取更多信息！