Western Blotting即蛋白質(zhì)印跡,是分子生物學、生物化學和免疫遺傳學中常用的一種實驗方法。其基本原理是通過特異性抗體對凝膠電泳處理過的細胞或生物組織樣品進行著色。通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細胞或組織中的表達信息,現(xiàn)已廣泛應用于基因在蛋白水平的表達研究、抗體活性檢測和疾病早期診斷等多個方面。
技術路線:
操作步驟:
1. 蛋白樣品制備及含量測定。
2. SDS-PAGE電泳。
3. 轉(zhuǎn)膜及免疫反應。
4. 化學發(fā)光,顯影,定影。
5. 凝膠圖象分析:拍照、半定量分析
服務要求:
1. 樣本要求:
1.1請您提供新鮮的且盡量多的材料:
組織樣本:≥50mg;
細胞樣本:≥106個;
抗凝全血樣本:2-5ml。
1.2或者不低于上述質(zhì)量的蛋白裂解液,我們會對蛋白裂解液進行質(zhì)檢,質(zhì)檢合格方進行正常檢測。這里提醒您提前蛋白一定要加蛋白酶抑制劑(更有包括磷酸酶抑制劑)
1.3 如果是低溫保存的樣本,-20℃保存的樣本最好不要超過2個月,-80℃保存的樣本不要超過6個月,液氮保存的樣本不要超過1年。如果您的樣本超出上述時限,造成隨后的實驗失敗,我們不承擔責任。(當然,我們也并未肯定超出時限的樣本肯定實驗失?。?
2. 蛋白信息:
2.1請您提供背景資料,包括目的蛋白的分子量大小,是否膜蛋白,參考文獻等.
2.2請您提供一抗(包括一抗來源、稀釋倍數(shù)等),也可由我們?yōu)槟?,我們代理多個品牌的國內(nèi)外抗體供您選擇。