該文章轉(zhuǎn)載自：莫納生物
眾所周知，逆轉(zhuǎn)錄是 RT-PCR 實驗的關(guān)鍵一步，逆轉(zhuǎn)錄酶也是此步驟中不可或缺的“靈魂角色”，那么，小伙伴們對它們是否有著充分的了解呢？
今天，莫納生物逆轉(zhuǎn)錄系列知識科普正式開啟！本系列共分為三部分，這一期，琴子將為您帶來第一部分——酶的發(fā)現(xiàn)、逆轉(zhuǎn)錄過程及 M-MLV 與 AMV 的區(qū)別。
接下來就請與我一同走進逆轉(zhuǎn)錄的世界吧！
逆轉(zhuǎn)錄的實驗?zāi)康木褪且咝У孬@得 cDNA，要達(dá)成這個目的，就要考慮如何選擇試劑。而在試劑選擇中，酶的選擇是非常關(guān)鍵的。
逆轉(zhuǎn)錄酶，全稱是依賴于 RNA 的 DNA 聚合酶，最早發(fā)現(xiàn)于部分 RNA 病毒中，具有逆轉(zhuǎn)錄活性，能夠以單鏈 RNA 為模板合成 DNA 的酶。
逆轉(zhuǎn)錄酶最初是在 1970 年由霍華德·馬丁·特明（Howard Temin）和戴維·巴爾的摩（David Baltimore）從 RNA 病毒中發(fā)現(xiàn)的。他們并因此獲得 1975 年度諾貝爾生理學(xué)或醫(yī)學(xué)獎。
模板：逆轉(zhuǎn)錄病毒單鏈 RNA 的基因組
引物：tRNA（主要是色氨酸 tRNA）
酶：逆轉(zhuǎn)錄酶（RNA 指導(dǎo)的 DNA 聚合酶活性）
過程：在模板、引物及酶的作用下合成一條 DNA 單鏈，為互補 DNA（complementary DNA，cDNA）與模板形成 DNA-RNA 雜合雙鏈。
酶：逆轉(zhuǎn)錄酶的 RNase H 活性
過程：水解雜合雙鏈中的 RNA，得到與 RNA 互補的 DNA 單鏈（cDNA）。
模板：新合成的互補單鏈 cDNA
底物：dNTP
酶：逆轉(zhuǎn)錄酶（DNA指導(dǎo)的 DNA 聚合酶活性）
過程：以 cDNA 單鏈為模板，以 dNTP 為底物，再合成雙鏈 DNA。
人類免疫缺陷病毒1型的逆轉(zhuǎn)錄酶（PDB：HIV）
莫洛尼鼠白血病病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶（MMLV）
禽成髓細(xì)胞瘤病毒的逆轉(zhuǎn)錄酶 （AMV）
維持真核細(xì)胞的染色體端粒存在的端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶
AMV 和 MMLV 是分子 PCR 檢測常用的兩種逆轉(zhuǎn)錄酶。AMV 反轉(zhuǎn)錄酶來源于禽類的病毒，RNaseH 活性較高，一邊做反轉(zhuǎn)錄，一邊就把 RNA 降解了，所以 AMV 反轉(zhuǎn)錄酶的反轉(zhuǎn)錄效率比較低。M-MLV 反轉(zhuǎn)錄酶來源于鼠類，它的 RNaseH 活性較低，所以反轉(zhuǎn)錄效率是比較高的。雖然野生型 M-MLV 逆轉(zhuǎn)錄酶的熱穩(wěn)定性差，抵抗二級結(jié)構(gòu)的能力弱，但可以通過基因改造彌補這些不足。
（野生型）M-MLV 和 AMV 的區(qū)別
我們知道逆轉(zhuǎn)錄酶由不同生化活性的不同結(jié)構(gòu)酶組成，其中逆轉(zhuǎn)錄活性和 RNaseH 活性決定了逆轉(zhuǎn)錄酶的性能。逆轉(zhuǎn)錄活性與酶的熱穩(wěn)定性密切相關(guān)。
下一期，我將帶大家詳細(xì)了解逆轉(zhuǎn)錄酶 RNaseH 活性和熱穩(wěn)定性對逆轉(zhuǎn)錄的影響，以及如何選擇逆轉(zhuǎn)錄酶，大家敬請期待吧！
莫納生物逆轉(zhuǎn)錄酶具有高熱穩(wěn)定性，較低 RNase H 活性，大幅提升了逆轉(zhuǎn)錄效率和 RNA 復(fù)雜二級結(jié)構(gòu)的耐受性，特異性更好、產(chǎn)率更高、更容易獲得全長 cDNA，最長可達(dá) 12kb。
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